雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中自噬作用的影响

目的:通过观察雷公藤甲素对氨基核苷嘌呤霉素(puromycin amino nucleotide,PAN)损伤足细胞的m TOR通路及自噬水平的影响,探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR-自噬通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)为研究对象,PAN分别不同时间(0 h、1 h、3 h、4 h、6 h、24 h)刺激小鼠足细胞,检测p-m TOR、Beclin1、synaptopodin表达含量的变化,成功构建PAN致足细胞损伤模型。后将足细胞随机分为以下4组:(1)对照组(Con组);(2)PAN组(PAN组,PNA 50μg/ml);(3)雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap组,PNA 50μg/ml+RAP 200 ng/ml);(4)PAN+TP组(TP组,PNA 50μg/ml+TP 10 ng/ml)。各组培养时间均为4 h;采用western blot检测足细胞p-m TOR、p-Akt、p-ULK1、LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达量。结果:PAN处理不同的时间梯度,与Con组相比,PAN处理4 h后,诱导p-m TOR的表达、减少Beclin1、synaptopodin表达(P0.05),成功建立PAN作用致体外足细胞损伤模型。与PAN组比较,雷公藤甲素可使p-m TOR、p-ULK1及p-Akt的表达明显上调(P0.05),而LC3、Beclin1及Synaptopodin的表达明显下降(P0.05)。结论:实验表明足细胞损伤可能与足细胞内自噬水平的变化有关,PAN刺激可能呈时间依赖性通过m TOR通路降低足细胞自噬水平,诱导足细胞损伤;雷公藤甲素可能通过作用m TOR通路调节足细胞自噬水平,从而对足细胞起保护作用。