| DNA甲基转移酶3b催化区保守序列shRNA真核表达载体构建 |
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| 引用本文： | 张士龙,曾甫清,朱朝辉,彭世波,汪良,董继华.DNA甲基转移酶3b催化区保守序列shRNA真核表达载体构建[J].华中医学杂志,2008,32(4). |
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| 作者姓名： | 张士龙 曾甫清 朱朝辉 彭世波 汪良 董继华 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,武汉,430022
2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,武汉,430022 |
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| 摘 要： | 目的构建针对基因DNA甲基转移酶3bmRNA催化区保守序列的shRNA真核表达载体，并对其克隆进行鉴定。方法以DNMT3bmRNA序列为靶基因设计3条shRNA和一条阴性对照HK，应用基因重组技术将其克隆到真核表达载体PGensil-1中，构建真核表达载体P-DNMT3b-shRNA1、P-DNMT3b-shRNA2、P-DNMT3b-shRNA3、P-HK。将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，接种于LB平板后分别挑取5个单克隆菌落进行扩增，经筛选后对提取质粒进行测序鉴定。结果重组质粒经SalI酶切鉴定得到大小2个基因片段，大片段约为4．55kb，小片段约为440bp，与设计相同；四组重组质粒经测序鉴定显示插入完全正确。结论成功构建了P-DNMT3b-shRNA（1、2、3）及HK真核表达载体，为下一步实验奠定了基础。
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| 关 键 词： | DNA甲基转移酶3b 基因 基因重组 RNA干扰 |
Construction of the eukaryotic expression vector carrying double shRNA sequence targeting the conserved domain of gene DNMT3b |
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