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| STAT5A基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的观察 | |
| 引用本文： | 曾永秋,杨华秀,曹洋,刘岚,税青林. STAT5A基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的观察[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2013, 20(1): 31-35 |
| 作者姓名： | 曾永秋 杨华秀 曹洋 刘岚 税青林 |
| 作者单位： | 1. 泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室 四川泸州646000 2. 泸州医学院附属中医院肝病科,四川泸州,646000 3. 泸州医学院生理学教研室 四川泸州646000 |
| 摘 要： | 目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨.方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应和细胞毒性,采用两载体共转染的方法转染人肝癌细胞HepG2,分别采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达的变化；采用MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:酶切及测序结果显示,STAT5A基因两位点的shRNA表达载体均构建成功；两载体共转染HepG2细胞48 h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率约为66％,P＜0.05；蛋白质印迹法检测结果显示,STAT5A蛋白的抑制率约为58％,P＜0.05；同时MTT法显示实验组较对照组在转染后24～96 h内细胞生长速度减慢、增殖抑制明显(P＜0.05),流式细胞仪检测实验组细胞凋亡率为(34.68±0.78)％,明显高于阴性对照组(5.12±1.09)％和空白组(4.75±1.65)％,P＜0.05.结论:成功构建了针对STAT5A基因的RNA干扰真核表达载体,两载体共转染可有效抑制STAT5A基因的表达,并能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡. |
| 关 键 词： | 肝肿瘤 STAT5A基因 RNA干扰 HepG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡 |
Effects of cotransfection of two sites of STAT5A-targeting shRNA expression vectors on proliferation and apoptosis of human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 |
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