| pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达 |
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| 引用本文： | 李嘉杰,闻海兵,邹树峰,严剑,洪涛.pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达[J].重庆医学,2012,41(9):884-887. |
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| 作者姓名： | 李嘉杰 闻海兵 邹树峰 严剑 洪涛 |
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| 作者单位： | 李嘉杰 (南昌大学医学院研究生院,330000) ； 闻海兵 (南昌大学医学院研究生院,330000) ； 邹树峰 (南昌大学医学院研究生院,330000) ； 严剑 (南昌大学医学院研究生院,330000) ； 洪涛 (南昌大学第一附属医院神经外科,330006) ； |
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| 摘 要： | 目的建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系。方法设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达Cx43的U251细胞中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性。采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平。结果酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞。结论构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 神经胶质瘤 转染 质粒 连接蛋白43 逆转录聚合酶链反应 |
Construction of eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1/Cx43 and its stable overexpression in U251 human glioma cells |
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| Li Jiajie,Wen Haibing,Zou Shufeng,Yan Jian,Hong Tao.Construction of eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1/Cx43 and its stable overexpression in U251 human glioma cells[J].Chongqing Medical Journal,2012,41(9):884-887. |
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| Authors: | Li Jiajie Wen Haibing Zou Shufeng Yan Jian Hong Tao |
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| Institution: | 1.Graduate School,Medical College of Nanchang University,Nanchang,Jiangxi 330000,China; 2.Department of Neurosurgery,the First Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang,Jiangxi 330006,China) |
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