| 携带IFN-5α基因的HBV DNA质粒构建及其表达 |
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| 引用本文： | 万辉,万谟彬,宋玉,薛建亚.携带IFN-5α基因的HBV DNA质粒构建及其表达[J].中华传染病杂志,2005,23(2):99-103. |
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| 作者姓名： | 万辉 万谟彬 宋玉 薛建亚 |
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| 作者单位： | 200433,上海,第二军医大学附属长海医院感染科 |
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| 摘 要： | 目的构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒，并在真核细胞中表达。方法在pBR322-B-HBV质粒(含adr Ⅰ型HBV DNA)中插入人工合成片段破坏其HBV—X基因区，再与IFN-5α片段连接，最后克隆入真核表达载体pcCNA3，获得携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α。同时构建两组对照质粒，即连接完整HBV DNA的真核表达质粒和连接X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒，将上述3种质粒以脂质体法同时转染HepG2细胞，G418筛选出稳定表达系统后选用荧光定量PCR法、ELISA法、RT-PCR法检测3种包装病毒。的复制表达以及IFN-5α的表达水平。结果获得目的真核表达质粒pcDNA3-KN—F1F2-IFN-5α；目的质粒转染HepG2细胞后其包装病毒的复制表达水平均较两个对照组降低；插入的IFN-5α片段可以在mRNA以及蛋白质水平表达。结论成功构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBVDNA真核表达质粒，并能在HepG2真核细胞中表达。
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| 关 键 词： | HBV DNA真核表达质粒 5α 质粒构建 HepG2细胞 荧光定量PCR法 基因缺陷 真核表达载体 ELISA法 PCR法检测 真核细胞 蛋白质水平 α基因 人工合成 脂质体法 表达系统 mRNA adr 基因区 片段 连接 RT- 对照组 插入 转染 病毒 |
| 修稿时间： | 2004年2月13日 |
Construction and HepG2 cell line expression of the plasmid containing IFN-5α gene and hepatitis B virus DNA with X gene deletion |
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| WAN Hui,WAN Mo-bin,SONG Yu,et al..Construction and HepG2 cell line expression of the plasmid containing IFN-5α gene and hepatitis B virus DNA with X gene deletion[J].Chinese Journal of Infectious Diseases,2005,23(2):99-103. |
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| Authors: | WAN Hui WAN Mo-bin SONG Yu |
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| Institution: | WAN Hui,WAN Mo-bin,SONG Yu,et al. Department of Infection Disease,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus Gene deletion Inteferon-alpha Transfection |
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