特异性核酶对宫颈癌细胞系CaSki增殖与凋亡的影响

目的：研究特异性抗HPV 16E6核酶对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：设计特异性切割HPV 16E6基因的核酶，构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSki细胞，命名为CaSki－R、CaSki－P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达，Northern blotting检测CaSki、CaSki－R、CaSki－P3种细胞中E6基因的表达。测定3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率，并以皮下接种率法检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率，并测定c-myc、bcl-2、p53、fas、PCNA、C－erbB-2等基因的表达。结果：点杂交证实该核酶能在CaSki－R细胞中稳定表达，Northern blotting证实CaSki－R中表达E6较CaSki－P、CaSki明显降低，出现凋亡峰，S期、GWMS期细百分率下降；而CaSki－P细胞无此改变。CaSki－R细胞表达HPV16E6、C－myc、Bcl-2、PCNA、C－erbB-2蛋白明显减少，而p53表达明显增高；CaSki和CaSki－R细胞中Fas蛋白的表达相近。CaSki－P细胞中各基因的表达与CaSki细胞无显著差异。结论：抗HPV16E6核酶的导入能阻碍宫颈癌细胞增殖，诱导其凋亡，其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低，以及由此而引起的细胞内一系列基因表达的改变。