Resistance to trimethoprim in Haemophilus influenzae

Summary The mechanisms of resistance to trimethoprim in eleven U.K. clinical isolates ofHaemophilus influenzae were studied. The levels of dihydrofolate reductase (DHFR) activities in crude extracts from four resistant wild-types were similar to those in susceptible controls. However, activities in extracts from the other seven resistant wild-type isolates, and transformants of two of these, were at least triple those in the sensititive strains. Resistance to trimethoprim was also selected forin vitro during prolonged exposure to the drug and was associated with increased levels of DHFR specific activity in the mutants. DHFR enzymes were, however, still very susceptible to inhibition by trimethoprim. Activities in four extracts, including one from a transformant of a resistant mutant, were reduced by at least 45% following incubation with 10^–8 M trimethoprim. The results suggested that overproduction of the chromosomal DHFR enzyme may be the resistance mechanism in some organisms. The much lower DHFR activities measured in extracts from other resistant isolates may reflect synthesis of chromosomal enzymes that have reduced susceptibility to trimethoprim.

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Trimethoprim-Resistenz bei Haemophilus influenzae

Zusammenfassung Resistenzmechanismen gegen Trimethoprim wurden bei 11 britischen Isolaten vonHaemophilus influenzae untersucht. Die Dihydrofolat-Reduktase-Aktivitäten in ungereinigten Extrakten aus vier resistenten Wildtyp-Stämmen waren mit denen empfindlicher Kontrollen vergleichbar. Dagegen waren die Enzymaktivitäten in den Extrakten aus den anderen sieben Wildtyp-Isolaten und aus Transformanten zwei dieser Stämme mindestens dreimal so hoch wie bei empfindlichen Stämmen. Gegen Trimethoprim resistente Stämme wurdenin vitro bei längerer Exposition gegenüber der Substanz selektiert. Die Resistenz der Mutanten war mit erhöhter Dihydrofolat-Reduktase-Aktivität assoziiert. Dennoch waren die Dihydrofolat-Reduktasen jeweils sehr gut durch Trimethoprim hemmbar. Nach Inkubation mit 10^–8M Trimethoprim wurden die Enzymaktivitäten in den vier Extrakten einschließlich dem Extrakt aus dem Transformanten einer resistenten Mutante um mindestens 45% reduziert. Nach diesen Ergebnissen ist möglicherweise die Überproduktion des chromosomal kodierten Enzyms Dihydrofolat-Reduktase bei einigen Stämmen für die Resistenz verantwortlich. Die sehr viel niedrigeren Dihydrofolat-Reduktase-Aktivitäten in Extrakten anderer resistenter Isolate könnten darauf beruhen, daß in diesen Stämmen chromosomal kodierte Enzyme mit verminderter Empfindlichkeit gegenüber Trimethoprim gebildet werden.