| 人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 陆建荣,王惠民,吴萍,黄松平,常秋月,凌勇武,倪晓蓉.人源抗菌肽LL-37表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达[J].第二军医大学学报,2007,28(8):833-837. |
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| 作者姓名： | 陆建荣 王惠民 吴萍 黄松平 常秋月 凌勇武 倪晓蓉 |
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| 作者单位： | 南通市第三人民医院感染病实验室,南通,226006;南通大学附属医院检验科,南通,226001;南通市中心血站,南通,226006 |
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| 基金项目： | 江苏省南通市科技局科研项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人源抗菌肽LL-37的表达载体pPIC9-LL-37,将其转化毕赤酵母GS115,诱导LL-37表达.方法:根据抗菌肽LL-37氨基酸序列及毕赤酵母偏爱密码子,应用互补延伸PCR技术扩增抗菌肽LL-37基因,定向克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9上,转化E.coli DH5α,构建重组分泌型酵母表达载体pPIC9-LL-37,PCR鉴定并测序;原生质球法转化毕赤酵母GS115,PCR扩增鉴定;甲醇诱导LL-37表达,筛选最高表达株,检测表达产物对大肠杆菌的抑菌活性,并对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹分析.结果: pPIC9-LL-37载体构建成功;转化毕赤酵母后PCR鉴定出LL-37基因;0.5%甲醇能诱导LL-37高表达,筛选出最高表达株,发酵上清约含LL-37 0.5 μg/ml,对E.coli具有较强的抑菌活性,电泳及Western印迹分析证实表达产物为LL-37.结论:成功构建pPIC9-LL-37载体,转化毕赤酵母后,经甲醇诱导能高表达分泌LL-37,表达的LL-37蛋白具有较强的抑菌活性.
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| 关 键 词： | LL-37 毕赤酵母 遗传载体 基因表达 |
| 文章编号： | 0258-879X（2007）08-0833-05 |
| 修稿时间： | 2007-01-11 |
Construction of human antimicrobial peptide LL-37 vector and its expression in Pichia pastoris |
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| LU Jian-rong,WANG Hui-min,WU Ping,HUANG Song-ping,CHANG Qiu-yue,LING Yong-wu,NI Xiao-rong.Construction of human antimicrobial peptide LL-37 vector and its expression in Pichia pastoris[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2007,28(8):833-837. |
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| Authors: | LU Jian-rong WANG Hui-min WU Ping HUANG Song-ping CHANG Qiu-yue LING Yong-wu NI Xiao-rong |
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| Institution: | 1, Lab of Infectious Diseases, The Third Hospital of Nantong, Nantong 226006, China; 2. Department of Clinical Laboratory, The Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 226001; 3. Nantong Blood Center, Nantong 226006 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | LL-37 |
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