survivin启动子有效片段的克隆及其在胃癌细胞AGS中的转录活性研究

目的 克隆survivin启动子的有效片段，并检测它在人胃癌细胞株AGS和人正常胃上皮细胞GES-1中的转录活性，为该启动子在胃癌的靶向性基因治疗中奠定基础。方法 用PCR扩增survivin基因的启动子片段，克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic，构建pGL3-sur-pro重组质粒，用脂质体法瞬时转染AGS及GES-1中，检测survivin启动子在细胞中的转录活性。同时构建含CMV启动子的pGL3-CMV-pro重组质粒作为阳性对照。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR扩增的survivin启动子片段长约440bp，测序结果与GenBank中survivin启动子序列一致。成功构建了pGL3-sur-pro重组质粒。荧光素酶活性检测显示，survivin启动子片段在细胞株AGS中有较高转录活性，而在GES-1中几无转录活性。结论 本实验克隆的survivin启动子有效片段在胃癌细胞株AGS中有转录活性，在正常胃上皮细胞中无活性。其有可能作为调控元件用于胃癌的靶向性基因治疗。