PCR和探针自我杂交──Northern Blot方法对二甲基苯蒽诱导的P_（450）Cyp~（1b－1）mRNA的定量

通过ＰＣＲ和探针自我杂交──ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法对０．３μＭ二甲基苯蒽（ＤＭＢＡ）诱导的２×１０６个小鼠胚胎成纤维细胞１０Ｔ１／２产生的Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ进行了定量。在这个方法中，与Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ相同的特定的单链ＣＤＮＡ探针片断通过ＰＣＲ合成。而双链探针中的一条链与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的特定片断是相同的。双链探针上的另一条链（Ｈ链）则与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的特定片断是互补的。用３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记Ｈ链后，它就能够与单链探针和Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ同时进行杂交。这样，就能用已知浓度的单链探针作为标准物制做标准工作曲线和对Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ的含量进行定量。经测定，在０．３μＭＤＭＢＡ分别于１、２、３、４、６小时对２×１０６个细胞进行诱导后，２×１０６个细胞在不同时间产生的Ｐ４５０Ｃｙｐ１ｂ－１ｍＲＮＡ分别为０．００９８、０．０１３５、０．０１７４、０．０１９０和０．０１２０μＭ。