| 人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定 |
| |
| 引用本文： | 胡雪菲,江文正.人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定[J].中国免疫学杂志,2015(1):77-81. |
| |
| 作者姓名： | 胡雪菲 江文正 |
| |
| 作者单位： | 华东师范大学生命科学学院上海 200241 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部新世纪优秀人才支持计划，上海大学生创新活动计划项目，国家大学生创新训练计划项目( No．1310269032)资助项目。 |
| |
| 摘 要： | 目的:克隆和表达人颗粒酶A(Granzyme A,Gzm A)基因的活性片段(active Granzyme A,a Gzm A)并进行活性鉴定。方法:以全长人Gzm A基因为模板,PCR扩增a Gzm A基因片段,限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后插入原核表达载体p ET24a(+),将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行分析。重组蛋白用镍层析柱亲和层析进行纯化后,利用BLT底物溶液进行活性鉴定。结果:PCR扩增得到长约700 bp的基因片段。重组质粒p ET24a-a Gzm A经酶切和测序证实a Gzm A基因序列正确插入载体质粒中。SDS-PAGE显示在26 k D处有一特异性蛋白条带。Western blot证实该蛋白可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。利用镍柱亲和层析法可从包涵体中纯化得到纯度较高的重组蛋白,且具有较好的酶活性。结论:成功制备了具有生物学活性的人颗粒酶A重组蛋白。
|
| 关 键 词： | 颗粒酶A 克隆 大肠杆菌 表达 活性测定 |
Expression,cloning and activity assay of active domain of human granzyme A |
| |
| HU Xue-Fei,JIANG Wen-Zheng.Expression,cloning and activity assay of active domain of human granzyme A[J].Chinese Journal of Immunology,2015(1):77-81. |
| |
| Authors: | HU Xue-Fei JIANG Wen-Zheng |
| |
| Institution: | HU Xue-Fei;JIANG Wen-Zheng;School of Life Sciences,East China Normal University; |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Granzyme A Cloning E coli Expression Activity assay |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
