| 糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建 |
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| 引用本文： | 赵晓山,罗仁,薛耀明,张曦倩,代方国,崔丽娟,傅婷婷.糖尿病肾病肾阴虚证DNA消减文库的构建[J].中华中医药学刊,2004,22(7):1204-1206. |
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| 作者姓名： | 赵晓山 罗仁 薛耀明 张曦倩 代方国 崔丽娟 傅婷婷 |
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| 作者单位： | 第一军医大学南方医院中医科,510515,广东,广州 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，广东省科技厅科技计划 |
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| 摘 要： | 在多年糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾虚证的研究中,结果发现血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关1].这提示肾阴虚证存在其相关基因.目前克隆疾病的相关基因有多种方法,其中抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性.目的:采用抑制性消减杂交技术(suppression sub-tractive hybridization,SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾阴虚证DNA消减文库.方法:选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交.用硅胶法抽提血白细胞DNA,用RsaⅠ酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建DN肾阴虚证DNA消减文库.结果:用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段,得到586个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库.结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础.
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| 关 键 词： | 糖尿病肾病 肾阴虚证 抑制性消减杂交 基因组消减文库 |
| 文章编号： | 1009-5276(2004)07-1204-03 |
Construction of DNA Subtractive Library of Kidney Yin Deficiency of Diabetic Nephropathy |
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