RNA干扰技术沉默STAT3对肺腺癌A549细胞生长抑制的作用

目的:利用RNAi技术研究STAT3对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,同时研究STAT3对CyclinDl,Bcl-2,BAX,Caspase-9的影响及其意义.方法:利用荧光定量PCR法检测后STAT3mRNA的表达,选取1条最能有效抑制STAT3mRNA的siRNA进行后续实验;利用AM-BLUE法检测STAT3siRNA的抑制率;利用流式细胞术(FCM)检测STAT3沉默前后肺腺癌A549细胞周期分布状况和凋亡情况;利用Western blot检测RNA干扰前后STAT3与CyclinDl ,Bcl-2,BAX,Caspase-9的蛋白表达.结果:STA3被沉默后,肺腺癌细胞A549生长被抑制(P<0.05);细胞处于Go/G1期(P<0.05),而S,G2/M期的细胞相对减少(P<0.05);凋亡细胞明显增多(P<0.05) ; STAT3基因被沉默后,CyclinDl、Bcl-2蛋白的表达明显降低(P<0.05),BAX,Caspase-9蛋白的表达增高(P<0.05).Person相关性分析显示,RNAi后人肺腺癌细胞A549中STAT3与CyclinDl,Bel-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),STAT3与BAX蛋白表达呈负相关(P<0.05),STAT3与Caspase-9蛋白表达无相关性(P>0.05).结论:RNA干扰技术抑制A549细胞STAB基因后,可阻断A549的细胞周期,使细胞阻滞在Go/G1期,无法进人到S,M期.同时可诱导肺腺癌A549细胞的凋亡.其机制可能为STAT3siRNA抑制了STAB基因的表达,从而使CyclinDl、Bcl-2蛋白表达降低,BAX蛋白表达增高.