| 大鼠线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 张君莉,黄永秀,张红,王丹,刘腾,李亚,王建东.大鼠线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[J].成都医学院学报,2015(6):644-648. |
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| 作者姓名： | 张君莉 黄永秀 张红 王丹 刘腾 李亚 王建东 |
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| 作者单位： | 1. 成都医学院生物医学系 成都610500;2. 成都医学院检验医学院 成都610500;3. 成都医学院第一附属医院检验科 成都610500 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金(31201045)，四川省应用基础研究计划项目(2012JY0113)，国家级大学生创新创业训练计划项目(201513705043)，发育与再生四川省重点实验室基金项目(SYS12-004) |
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| 摘 要： | 目的 构建线粒体膜蛋白Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体.方法 PCR扩增获得Nix基因序列,与经BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切的pHBLV-CMVIE-IRES-Puro载体连接获得Nix过表达重组慢病毒载体;以Nix为靶基因,合成寡核苷酸,退火形成双链DNA,与经BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切的pHBLV-U6-Scramble-Puro载体连接获得Nix shRNA重组慢病毒载体;将病毒包装辅助质粒与上述重组慢病毒载体共转染293T细胞,收集上清液并浓缩获得慢病毒浓缩液,3倍梯度稀释法测定病毒滴度;用病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤酶素筛后得到稳定感染细胞株;荧光显微镜检测Nix荧光水平,Western blot检测Nix蛋白的表达.结果 成功构建Nix基因过表达和shRNA慢病毒载体,并在293T细胞中包装获得病毒.重组病毒感染PC12细胞后,荧光显微镜检测Nix基因过表达细胞荧光水平增加,shRNA感染细胞荧光水平降低;Western blot检测显示Nix基因过表达PC12细胞中Nix蛋白表达显著升高,shRNA慢病毒感染细胞中Nix蛋白表达明显降低,而Nix shRNA1干扰效果最好.结论 成功构建Nix基因过表达与shRNA慢病毒载体,并获得Nix过表达与干扰细胞模型.
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| 关 键 词： | Nix shRNA 慢病毒载体 PC12细胞 |
Construction and Identification of Nix Gene Overexpression and shRNA Lentiviral Vector in Mouse Mitochondrial Membrane Protein |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nix shRNA Lentivirus PC12 cells |
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