DNA体外复制所需提取物的快速制备

介绍一种 DNA体外复制所需胞浆蛋白提取物快速制备的新方法。方法 :透析液与传统方法不同之处在于 1蔗糖含量为2 0 % ;2 Na Cl浓度从 5 0 m mol/ L 减少到 2 5 mm ol/ L。使用的培养细胞为 2 5～ 5 0 μl,用 5倍细胞体积 ( PCV)的低渗缓冲液重新制成悬浮液。在冰上裂解 10分钟 ,反复冻融三次使细胞裂解 ,裂解后加入 0 .11体积的高盐缓冲液 ,生成等渗条件 ,核皱缩恢复正常而获得大量提取物。通过透析减少提取物中盐浓度。透析后 ,离心获取提取物。Bradford法测得蛋白浓度约为 9～ 15 mg/ ml。比较两法所获提取物对 SV40 DNA体外合成的…