110. 维生素B6对H22小鼠肝癌细胞的细胞毒作用

目的：研究维生素B6（吡哆醇）对体外培养的H22小鼠肝癌细胞的细胞毒作用。方法：①细胞培养：H22小鼠肝癌细胞生长于含15％灭活小牛血清、 100 μ／ml青霉素和100 μg／ml链霉素的DMEM完全培养基中，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养；②MTT（噻唑蓝）法检测14种化疗药物对H22细胞的细胞毒作用；③不同浓度的维生素B6对H22细胞的作用：预先将盐酸吡哆醇（PN*CL）用无血清培养基配制成20 mmol/L、30 mmol/L、40 mmol/L、60 mmol/L的贮存液-20℃保存备用。各试验组终浓度分别为2 mmol/L、3 mmol/L、4 mmol/L、6 mmol/L，MTT法测定PN的细胞毒性；④维生素B6作用不同时间对H22细胞细胞毒性的影响：分别于培养24 h、48 h、72 h终止反应读取结果。统计学处理采用方差分析和Q检验。结果：按照相对抑制率IR％=1-试验组OD值／对照组OD值×100％的公式计算各种药物的抑制率，以IR＜30％为不敏感、30％≤IR≤50％为敏感、 IR≥50％为高度敏感作标准，对H22细胞高度敏感的有Ara-C（77%)和ICTX（74％）；敏感的有HRT（36％）、VP-16（31％）、CBDCA（42％）、eADM（45％）；其余均不敏感（IR=-14％至22％），因此作者选择1×105／ml细胞浓度作为本实验的基础，并从敏感药物中选择卡铂作为阳性对照。试验②中各实验组平均OD值（以±s表示）依次为0.775±0．028，0．666±0．046，0．579±0．038，0．469±0.041，而阴性对照组平均OD值为1.055±0.072，实验组对阴性对照组的IR%随给药浓度的增加而增加(26.5%,36.8%,45.1%和55.6%,P＜0.01)，而且终浓度为3 mmol/L的吡哆醇与终浓度为13.9 μg/ml的阳性对照卡铂的细胞毒作用相当，IR值均为36.8%，而PN终浓度为4 mmol/L时与浓度为31 μg/ml的eADM的作用相当。从所做的药物剂量-效应曲线上可知IC50=5 mmol/L。此外，药物与细胞接触的最初24 h各组平均OD值无明显差别(0.81±0.066;0.86±0.02;0.853±0.023;0.797±0.105;P＞0.05)，培养48 h(平均OD=0.775±0.028;0.666±0.046;0.579±0.038;0.469±0.041)和72 h(平均OD=0.74±0.086;0.50±0.046;0.42±0.062;0.32±0.02)后平均光密度值随给药浓度增加而增加，各组之间有显著差别(P＜0.01)。结论：维生素B6对体外培养的H22小鼠肝癌细胞的生长具有抑制作用，二者之间有剂量、时间依赖性关系，其抑癌作用同抗癌药eADM(31μg/ml)对H22细胞的抑制作用基本相当。