人Smith D1抗原在原核细胞中的表达与纯化及临床应用

目的获得人Smith D1（Sm D1）抗原基因，并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑（dot immunogold filtration assay，DIGFA）检测方法。方法采用基因工程技术，通过PCR从人白血病HL-60细胞cDNA文库中扩增人Sm D1抗原基因，构建pGEX-5T-Sm D1重组表达载体，在大肠杆菌B1221中通过异丙基硫代半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达Sm D1蛋白。利用初步纯化的Sm D1抗原建立DIGFA。结果重组质粒测序和酶切结果显示Sm D1抗原基因正确插入pGEX-5T，重组蛋白、复性及纯化产物经12％十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），在相对分子质量为39000处有一明显的蛋白表达条带，免疫印迹法分析表明，重组蛋白具有人Sm D1抗原的抗原性。DIGFA与色疫印迹法检测结果的差异无统计学意义（P〉0．05），二者的符合率为91．7％。DIGFA敏感度为100％，特异度为83．3％结论通过基因工程技术制备获得初步纯化的谷胱苷肽转移酶（GST）-Sm D1融合蛋白，用该抗原建立的DIGFA与免疫印迹法相似，且具有快速、简便和可靠等优点。

Prokaryotic expression and purification of human Smith D1 antigen