| 人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析 |
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| 引用本文： | 曹志敏,张颖妹,陈英玉,马大龙. 人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析[J]. 北京大学学报(医学版), 2000, 32(4): 306-309 |
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| 作者姓名： | 曹志敏 张颖妹 陈英玉 马大龙 |
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| 作者单位： | ^A北京大学基础医学院免疫学系,北京,100083^B北京大学^C1447 |
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| 摘 要： | 目的:了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser100磷酸化位点与其促凋亡效应的关系.方法:利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19 Ser100→Ala100突变体,用DNA测序技术验证,大肠杆菌表达,离子交换技术纯化重组突变蛋白,将其加入培养的白血病细胞株HL-60,通过PI染色,流式细胞仪分析,观察突变重组蛋白的促凋亡效应.结果:构建成TFAR19 Ala100突变体,并经DNA测序所证实,在大肠杆菌中获得了高水平表达,Western blot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL-60细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应. 结论:TFAR19 分子中潜在的Ser100磷酸化位点对其促凋亡效应无影响,提示TFAR19发挥其生物学活性时无需cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶活化.
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| 关 键 词： | TFAR19 点突变 凋亡 氧化磷酸化 重组蛋白质类/代谢 |
Site-directed mutagenesis of human TFAR19 and its expression,purification and functional analysis |
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| CAO Zhi-Min,ZHANG Ying-Mei,CHEN Ying-Yu,MA Da-Long. Site-directed mutagenesis of human TFAR19 and its expression,purification and functional analysis[J]. Journal of Peking University. Health sciences, 2000, 32(4): 306-309 |
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| Authors: | CAO Zhi-Min ZHANG Ying-Mei CHEN Ying-Yu MA Da-Long |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TFAR19 Point mutation Apoptosis Oxidative phosphorylation Recombinant proteins/metab |
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