应用重组抗-HPA-1a的一步全血HPA-1aELIST定型法

由HPA-1a引起的严重新生儿同种免疫性血小板减少症,需输注HPA-1a阴性的血小板来快速纠正血小板数。建立HPA-1a阴性的供者队伍需要简单可靠的HPA-1a定型方法。现在多数应用多克隆抗体技术,这种技术耗时,从而影响血小板分离。作者用抗-HPA-1a的重组IgG1研制了一种基于ELISA技术的定型试验,这种试验克服了过去的技术存在的问题。这个试验用孵育单克隆RFGP56可以从20ul的全血中检出GPⅡb/GPⅢa,连接辣根过氧化物酶(HRP)IgG1重组抗体可以检测HPA-1a抗原。在1小时内能对96份标本进行HPA-1a定型。在一次试验中,检测了782份随机供者的标本,鉴定出19汾HPA-1a阴性标本(2.4％)。HPA-1a阴性标本的平均OD值为0.097(平均值 3sd=0.278),而阳性标本的平均OD值为1.42(平均值-3sd=0.6)。所有HPA-1a阴性的标本用以下方法确认:通过流式细胞仪用异硫氰酸荧光素(FITC)-标记的抗—HPA—1a的重组IgG1对全血进行检测;通过流式细胞仪用多克隆抗HPA-1a对提纯的血小板进行检测和应用PCR-序列特异性引物(SSP)方法。总结,用重组抗-HPA-1a连接HRP,我们研究了一种只用20ul的全血快速定型技术,这种技术适用于半自动化检测。