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| EB病毒BARF1基因真核表达载体的构建 | |
| 引用本文： | 刘智群,王梅梅,侯灵彤,张放,熊亚南,刘敏,李淑英.EB病毒BARF1基因真核表达载体的构建[J].华北煤炭医学院学报,2012,14(1). |
| 作者姓名： | 刘智群 王梅梅 侯灵彤 张放 熊亚南 刘敏 李淑英 |
| 作者单位： | 1. 河北联合大学冀唐学院,河北唐山,063000 2. 河北联合大学基础医学院,河北唐山,063000 3. 河北联合大学附属医院,河北唐山,063000 4. 唐山市中医院 |
| 摘 要： | ①目的 构建携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.②方法 根据GenBan提供的BARF1基因的cDNA序列,设计特异性引物,并在两端添加酶切位点;常规培养B95-8细胞,提取细胞RNA,通过RT-PCR扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coli DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切与测序鉴定,证实BARF1基因已克隆到pUM-T载体.凝胶回收双酶切产物BARF1片段,再将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his,转化E.coli DH5α,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和XbaI双酶切分析,确认插入方向.③结果 以B95-8细胞提取RNA进行RT-PCR扩增的cDNA为模板扩增BARF1,得到与预期片段大小相符的666bp的片段;对所提质粒进行鉴定后,证实目的 基因BARF1片段已插入pUM-T载体,经双酶切和测序分析,确认BARF1基因已正确连接到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体.④结论 成功地构建真核表达载体.pcDNA3.1(+)/BARF1-his. |
| 关 键 词： | EB病毒 BARF1基因 真核表达载体 |
Construction eukaryotic vector for BARF1 gene of epstein-barr virus |
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