| 嗜热吸水链霉菌cDNA文库构建及其抗原相关基因的表达 |
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| 引用本文： | 许蕾,王玲玲,刘朔,凌媛,马列,王群,张丽娇,何晓雨,赵明静,王笑歌.嗜热吸水链霉菌cDNA文库构建及其抗原相关基因的表达[J].中华结核和呼吸杂志,2012,35(3). |
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| 作者姓名： | 许蕾 王玲玲 刘朔 凌媛 马列 王群 张丽娇 何晓雨 赵明静 王笑歌 |
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| 作者单位： | 中国医科大学附属第四医院呼吸内科,沈阳,110032 |
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| 基金项目： | 国家“十一五”科技支撑计划课题,中华医学会临床医学科研专项资金项目,辽宁省教育厅2009年度高等学校科研项目计划 |
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| 摘 要： | 目的 构建嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行表达序列标签(EST)测序,从中筛选具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达.方法 利用RNA转录5’末端转换技术构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库,将平板内克隆进行编号,取前1020个克隆提取质粒,进行EST测序.用生物信息学方法分析EST测序结果并预测基因功能,从中筛选出可能引起人体免疫反应的毒力因子.将这些目的基因亚克隆入pET-28a载体,将重组子转化大肠杆菌BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导相应蛋白的表达.结果 成功构建了较高质量的嗜热吸水链霉菌cDNA文库,得到有义序列978个,获得单一基因347个,其中2段基因分别与胸膜肺炎放线菌外膜蛋白、转铁蛋白B的同源性为51％和42％,其开放阅读框长度分别为1554 bp和726 bp,分别编码517和241个氨基酸.将2段基因亚克隆入原核表达载体中,IPTG诱导表达产物的相对分子质量分别为63 000和30 000.结论 所构建的嗜热吸水链霉菌cDNA文库符合构建基因文库的质量要求,文库中的EST数据将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选.
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| 关 键 词： | 农民肺 基因文库 抗原 嗜热吸水链霉菌 |
cDNA library constructing and specific antigen expression of Streptomyces thermohydroscopicus |
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| XU Lei
,
WANG Ling-ling
,
LIU Shuo
,
LING Yuan
,
MA Lie
,
WANG Qun
,
ZHANG Li-jiao
,
HE Xiao-yu
,
ZHAO Ming-jing
,
WANG Xiao-ge.cDNA library constructing and specific antigen expression of Streptomyces thermohydroscopicus[J].Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases,2012,35(3). |
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| Authors: | XU Lei WANG Ling-ling LIU Shuo LING Yuan MA Lie WANG Qun ZHANG Li-jiao HE Xiao-yu ZHAO Ming-jing WANG Xiao-ge |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Farmer's lung Gene library Antigens Streptomyces thermohydroscopicus |
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