重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

目的： 构建重组真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ并检测其在体外培养的Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法：利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ表达质粒，脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞，酶联免疫吸附法（ELISA）检测0、2、5和10 Gy X射线诱导IFNγ表达的量效和时程关系。结果：酶切鉴定证实，Egr-1启动子和IFNγ基因正确插入真核表达载体pIRES1neo；2、5和10 Gy X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞，上清中IFNγ表达量明显高于假照组（P＜0.001），其中5 Gy照射后表达量最高，为假照组的4.39倍。5 Gy照射后2、6、12和36 h上清中IFNγ表达量逐渐增加（P＜0.001），照射后36 h表达量为照射前的6.27倍。结论：成功构建了真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ，该质粒具有辐射诱导基因表达增强特性。