天力克注射液诱导HepG-2肝癌细胞自噬及对端粒酶活性的影响

目的:研究复方虫草制剂-天力克注射液对人肝癌细胞HepG-2抗肿瘤作用的分子机制及其对端粒酶活性的影响。方法:用透射电镜观察超微结构的变化;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态的变化;应用流式细胞仪(FCM)PI染色检测细胞周期变化及bcl-2的变化,AV/PI双染检测细胞膜的改变;免疫组化方法测定Sur-vivin蛋白及NF-κBp65的表达;用TRAP-PCR-银染法对肝癌细胞端粒酶活性进行检测。结果:Hoechst33258荧光染色显示天力克使细胞核轻微浓缩;免疫组化显示天力克使Survivin蛋白及NF-κBp65的表达下调(P<0.0005);FCM检测结果显示天力克作用后,S期细胞比例增高,G0/G1期及G2/M期细胞比例下降(P<0.0005),并使bcl-2表达下降;Annexin-V/PI染色后流式细胞仪检测,天力克组出现明显磷脂酰丝氨酸(phosphatdylserine,PS)膜外翻;TRAP-PCR-银染法显示天力克使端粒酶活性下调(P<0.01)。结论:天力克对人肝癌细胞的作用主要是细胞自噬,导致细胞浆空泡变性,胞浆内容物降解,轻度的染色质浓缩;明显改变细胞周期,阻滞细胞于S期,细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,膜结构发生改变;其诱导细胞自噬作用机制主要与抑制端粒酶活性、下调Survivin蛋白、NF-κBp65及bcl-2的表达有关。