慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系抑制人晶状体上皮细胞的研究

目的探讨慢病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷体系（HSV—tk／GCV）对人晶状体上皮细胞（LECs）系的杀伤效应的机制。方法HSV—tk基因和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因共表达的慢病毒感染细胞为试验组,仅表达EGFP的慢病毒感染细胞和正常细胞为对照组。流式细胞仪检测病毒的转染效率,荧光显微镜观察及基因组PCR和RT-PCR检测基因在LECs内表达,DNA ladder和电镜观察该系统对LECs的杀伤作用,检测HSV—tk／GCV系统的浓度时间依赖性和旁观者效应。结果HSV—tk整合入LECs并高效表达。10～25μg／ml的GCV能明显诱导转染HSV—tk的细胞凋亡或坏死,且随GCV浓度升高和作用时间延长效应增强,且存在明显的旁观者效应,而对照组细胞无显著改变。当GCV浓度〉25μg／ml,对照组细胞的增殖也被显著抑制。结论GCV可高效杀伤表达HSV-tk的LECs,且旁观者效应显著增强了HSV—tk／GCV系统的杀伤效果。HSV—tk和EGFP共表达的慢病毒载体能高效稳定转染LECs。

The effect of lentivirus-mediated suicide gene therapy on lens epithelial cells