| 骨形态发生蛋白2基因转染人羊水干细胞复合β-磷酸三钙支架促进骨再生 |
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| 作者姓名： | 马超, 刘光旺, 张艳玲, 高娟, 郭含军, 曲新华, 翟赞京, 谢幼专, 戴尅戎 |
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| 作者单位： | [1]东南大学医学院附属徐州市中心医院骨科,江苏徐州221009; [2]徐州医学院徐州临床学院;,江苏徐州221009; [3]上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科,江苏徐州221009; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（81071453）;江苏省中医药局项目（LZ13132）;江苏省科技厅临床诊疗技术攻关项目（BL2014026）;徐州市首届医学青年后备人才计划（2014006）;徐州市中心医院博士创新团队科技项目（XZB201236） |
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| 摘 要： | 目的研究重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白2（BMP-2）基因转染人羊水干细胞（hAFSC）的体外成骨分化，评价基因修饰的hAFSC负载于β-磷酸三钙（β-TCP）多孔支架后体内成骨能力。方法收集人工破膜后的中段羊水原代培养hAFSC，免疫磁珠分选CDl17／c-kit阳性的hAFSC，分别转染腺病毒介导的BMP-2或增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因，转染组转染BMP-2和EGFP基因、对照组转染无BMP-2编码序列的EGFP基因，空白组不做病毒转染。48h后荧光显微镜下观察细胞荧光表达及生长状况，应用流式细胞仪检测转染率。转染第7、14、21、28天采用ELISA检测各组hAFSC培养液中的BMP．2分泌量以确认转染后目的蛋白表达效果。各组hAFSC成骨诱导14d后进行碱性磷酸酶（ALP）染色，28d后进行茜素红染色评价成骨能力；成骨诱导3、7、14d后定量检测各组细胞ALP活性。20只8周龄裸小鼠随机分为Adv-hBMP-2-hAFSC-β-TCP组、Adv-EGFP-hAFSC-β-TCP组、hAFSC-β-TCP组和β-TCP组，每组5只，将细胞载体复合物植入各组裸小鼠股骨，8周后观察异位成骨组织学情况。结果hAFSC生长良好，Adv-hBMP-2或Adv-EGFP基因转染48h后荧光显微镜下见细胞贴壁良好，发出强绿色荧光，无死细胞产生，转染阳性率达（89．00±4．25）％。转染Adv-hBMP-2组hAFSC培养液上清中BMP-2第7、14、21、28天分别为（3．405±0．229）μg／L、（4．575±0．179）μg／L、（3．910±0．175）μg／L、（2．694±0．205）μg/L，第14天蛋白BMP-2分泌已达到高峰且第28天仍有蛋白表达，各时间点均明显高于对照组与空白组（均P〈0．05）。hAFSC成骨诱导14d后细胞相连成片，与对照组及空白组比较，ALP染色转染组染色阳性面积更大、阳性细胞数量更多。成骨诱导28d后茜素红染色见转染组细胞多中心聚集，伴大量红色钙结节形成，结节数量与大小明显优于对照组与空白组。成骨诱?
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| 关 键 词： | 骨形态发生蛋白质类 羊水干细胞 基因 转染 β-磷酸三钙支架 骨再生 |
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