实时RT-PCR基因表达相对定量REST(C)软件分析与2(-△△CT)法比较

目的利用实时RT-PCR技术建立一种简便、准确的基因表达相对定量方法。方法以正常的人支气管上皮细胞株（16HBE）eDNA为模板5倍系列稀释，分别作DNA聚合酶K（POLK）和磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因标准曲线。以不同剂量反式二羟环氧笨并芘（anti-BPDE）诱导的16HBE、anti—BPDE转化的16HBE及肺癌细胞株（H1299）cDNA为模板，进行实时定量RT—PCR。以GAPDH基因作为内参照，进行POLK基因表达相对定量。实验数据分别采用2^（-△△CT）法及REST软件分析。结果5倍系列稀释法制作的标准曲线，呈现较好的线型关系（Rsq 0．997）。POLK及GAPDH基因扩增效率分别为117．5％和103．5％。采用2^（-△△CT）法计算出的表达比值均比REST软件分析高。结论实时RT-PCR技术结合REST软件分析是一种简便、准确的基因表达相对定量分析手段。