| 人Regucalcin cDNA真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 徐洪,胡亮,倪培华,吴洁敏,赵涵芳.人Regucalcin cDNA真核表达载体的构建及表达[J].中国实验诊断学,2006,10(6):624-628. |
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| 作者姓名： | 徐洪 胡亮 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院,生物化学与分子生物学教研室,上海,200025
2. 上海交通大学医学院,检验系 |
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| 基金项目： | 国家研究发展基金;上海市教委资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建人regucalcin（RGN）全长cDNA的真核表达载体，观察其在人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）中表达。方法用RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA，将扩增的产物连接入pMD18-T克隆载体上。将重绢质粒转化人大肠杆菌DHSa内并提取质粒，双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确，再用双酶切方法将RGN基因定向连接到真核表达载体DECFP-NI中，构成pEGFP-RGN，将pEGFP-RGN转化人大肠杆菌DHSa内并提取质粒，双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确。再用双酶切方法将RGN基因与EGFP定向连接到真核表达载体pcDNA3．1（＋）-zeocin中，构建真核表达pcDNA3．1-RGN-EGFP-zeo的重组体。将pcDNA3．1-RGN．EGFP-zeo转化人大肠杆菌DHSa内并提取质粒，双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确，用脂质体转染入HK-2细胞。荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察pcDNA3．1-RGN-EGFP-zeo表达情况。结果RGNcDNA全长是897bp。以此构建的pcDNA3．1-RGN-EGFP-zeo真核表达载体，经DNA测序与GenBank中的人RGNcDNA序列一致。荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察到pcDNA3．1-RGN-EGFP-zeo转染的细胞中有绿色荧光蛋白的表达。结论本实验成功构建了pcDNA3．1-RGN．EGFP．zeO真核表达质粒，并在HK-2细胞中表达。
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| 关 键 词： | 真核表达载体 转染 |
| 文章编号： | 1007-4287（2006）06-0624-05 |
| 收稿时间： | 2006-02-27 |
| 修稿时间： | 2006年2月27日 |
Construction of human regucalcin eukaryotic expression vectors and expression |
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| XU Hong , HU Liang , NI Pei-hua ,et al..Construction of human regucalcin eukaryotic expression vectors and expression[J].Chinese Journal of Laboratory Diagnosis,2006,10(6):624-628. |
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| Authors: | XU Hong HU Liang NI Pei-hua |
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| Institution: | XU Hong , HU Liang , NI Pei-hua , et al. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Regucalcin |
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