原花青素调控抑癌基因 p53/AMP活化蛋白激酶通路抑制多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞自噬的实验研究

目的 观察原花青素对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞自噬的抑制作用,并探讨其对抑癌基因p53(p53)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)通路的调控作用.方法 60只成年雌性SD大鼠按照1～60自然数编号后以随机数字表法分为N组、M组、P组、LD组、MD组和HD组,每组各10只.除N组外均建立PCOS模型.P组于建模成功后给予枸橼酸氯米芬溶液5.21 mg/kg灌服;LD组、MD组和HD组分别给予25、50、100 mg/kg原花青素灌服,N组和M组均给予等量生理盐水灌服,连续24 d.对比治疗前后血清性激素水平;苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学变化;流式细胞术测定卵巢颗粒细胞自噬率;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定卵巢组织p53、AMPK mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测p53、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、AMPK蛋白表达及AMPK的磷酸化水平(p-AMPK).结果 治疗后N组血清性激素水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05),M组血清睾酮、促黄体生成素(FSH)水平均升高,雌二醇水平下降(P<0.05);治疗前M组、P组、LD组、MD组和HD组血清睾酮、FSH水平均高于N组,雌二醇水平均低于N组(P<0.05);治疗后P组、LD组、MD组和HD组颗粒细胞自噬率分别为(11.20±1.82)％、(13.45±2.10)％、(11.08±1.79)％和(9.86±1.05)％,每两组间血清睾酮、FSH水平和颗粒细胞自噬率对比,N组0.05),余每两组间差异有统计学意义(P<0.05);治疗后每两组间血清雌二醇水平对比,N组>HD组>MD组/P组>LD组>M组,除MD组与P组差异无统计学意义(P>0.05),余每两组差异有统计学意义(P<0.05);N组卵泡排列整齐,大小均匀,结构清晰,颗粒细胞规整,可达8～9层,大多均可见卵丘,余五组均有不同程度改变,HD组与N组接近;各组卵巢组织p53 mRNA、p53、LC3Ⅱ蛋白表达及p-AMPK水平差异有统计学意义(P<0.001),每两组间对比,N组>HD组>MD组/P组>LD组>M组,除MD组与P组差异无统计学意义(P>0.05),余每两组间差异有统计学意义(P<0.05);每两组间LC3Ⅱ蛋白表达及p-AMPK对比,N组0.05),余每两组间差异有统计学意义(P<0.05);各组卵巢组织AMPK mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 原花青素可改善PCOS大鼠性激素水平,减轻病理改变,抑制颗粒细胞自噬,推测是通过调控p53/AMPK通路,上调p53基因及蛋白表达,抑制AMPK的磷酸化,控制LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化实现的.

Proanthocyanidin regulates p53/AMPK pathway to inhibit autophagy of granulosa cells in rats with polycystic ovary syndrome