| 青天葵中SKP1同源基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 黎斯敏,左紫梅,詹若挺,何瑞.青天葵中SKP1同源基因的克隆及原核表达[J].中草药,2021,52(11):3383-3390. |
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| 作者姓名： | 黎斯敏 左紫梅 詹若挺 何瑞 |
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| 作者单位： | 广州中医药大学中药学院(中医药数理工程研究院)广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部;重点实验室 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006 |
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| 基金项目： | 广东省省级乡村振兴战略（农业科技创新及推广体系建设）专项-广东省现代南药产业技术体系创新团队（粤财农[2020]100号） |
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| 摘 要： | 目的从青天葵Nervilia fordii克隆SKP1的同源基因NSKs,并对编码的蛋白进行生物信息学分析及原核表达,为了深入研究青天葵中SCF复合体的功能奠定基础。方法从青天葵转录组中筛选得到5条SKP1同源基因序列(NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11),构建pGEX-4T-NSKs原核表达载体于大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达GST-NSKs融合蛋白并进行纯化。结果 NSK2、NSK3、NSK5、NSK7、NSK11的开放阅读框(ORF)分别为495、483、489、498和486 bp,编码164、160、162、165和161个氨基酸,蛋白相似性达到73.65%,均属于SKP1蛋白家族,具F-box和Cullin蛋白结合位点。亚细胞定位预测NSK2、NSK3和NSK5定位于细胞核,而NSK7和NSK11定位于细胞质和细胞核。系统进化树结果表明,NSK2、NSK3和NSK5聚为一簇,与小麦和玉米等的同源性较高;NSK7和NSK11聚为一簇,与多头绒泡菌的同源性较高。通过构建原核表达载体,确定了在大肠杆菌Rosetta (DE3)中的有利诱导条件,成功诱导表达并纯化得到5个GST-NSKs重组蛋白。结论成功克隆5个SKP1同源基因NSKs,获得NSKs蛋白,为深入研究青天葵中SCF复合体的功能提供了一定的基础。
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| 关 键 词： | 青天葵 NSK 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2020/9/6 0:00:00 |
Cloning and prokaryotic expression of SKP1 homologous genes from Nervilia fordii |
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| LI Si-min,ZUO Zi-mei,ZHAN Ruo-ting,HE Rui.Cloning and prokaryotic expression of SKP1 homologous genes from Nervilia fordii[J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2021,52(11):3383-3390. |
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| Authors: | LI Si-min ZUO Zi-mei ZHAN Ruo-ting HE Rui |
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| Institution: | Guangdong Provincial Key Laboratory of New Drug Development and Research of Chinese Medicine, Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan, Ministry of Education, Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, College of Traditional Chinese Medicine (Mathematical Engineering Academy of Chinese Medicine), Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nervilia fordii (Hance) Schltr NSK gene cloning bioinformatics analysis prokaryotic expression |
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