肾气丸对自然衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能损伤的保护作用及其机制研究

目的研究肾气丸对衰老所致雄性大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法将SPF 级SD 雄性大鼠随机分为4 组，分别为青年对照组（2 月龄）、衰老模型组（17 月龄）及肾气丸低、高剂量组（0.1、0.4 g·kg-1，17 月龄），每组8 只，分别给予普通饲料或含药饲料持续喂养4 个月。HE 染色法观察睾丸组织形态变化并测量生精上皮厚度和生精小管直径；透射电镜观察睾丸组织紧密连接超微结构；Western Blot 法检测睾丸组织中波形蛋白（Vimentin）、闭合蛋白（Occludin）、闭锁连接蛋白-1（Zonulaoccludens-1，ZO-1）和β-连环蛋白（β-catenin）表达水平；双标免疫荧光法检测睾丸支持细胞中Vimentin、β-catenin、ZO-1 和磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶（Phosphorylated p38 Mitogen-activated protein kinase，p-p38MAPK）的表达和定位。结果HE 结果显示，肾气丸能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化，提高生精上皮厚度（P＜0.05）和生精小管直径（P＜0.05，P＜0.01）；透射电镜结果显示，肾气丸能明显改善自然衰老大鼠支持细胞紧密连接超微结构；Western Blot 结果显示，肾气丸能明显上调自然衰老大鼠睾丸组织中Vimentin、Occludin、ZO-1 和β-catenin 蛋白表达水平（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）；免疫荧光结果显示，肾气丸能明显上调衰老大鼠睾丸支持细胞Vimentin、ZO-1 和β-catenin 蛋白表达水平，下调支持细胞p-p38MAPK蛋白表达水平。结论肾气丸可减轻自然衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤，其机制可能与下调支持细胞p38MAPK 信号通路有关。