吉非替尼通过调控表皮生长因子受体影响兔膝骨关节炎软骨损伤作用的机制

目的 研究吉非替尼通过调控表皮生长因子受体(EGFR)影响兔膝骨关节炎模型软骨损伤作用机制.方法 将30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、吉非替尼组,模型组与吉非替尼组均采用Hulth-Telhag方式制成膝骨关节炎模型,假手术组仅剪开关节全不做任何处理,造模成功后吉非替尼组给予吉非替尼灌胃给药85 mg/kg,1次/天,其他组给予等量的生理盐水,连续给药4周.停药1周后苏木精-伊红(HE)染色观察软骨病理组织情况及Mankin′s评分,原位末端标记法(TUNEL)染色观察软骨细胞凋亡情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测兔关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.免疫组化法检测软骨组织中骨代谢标志物Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)阳性表达情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测软骨组织中EGFR、丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白的表达情况.结果 与假手术组相比,模型组关节软骨层明显变薄,并且有溃裂和裂隙情况存在,同时软骨柱状排列消失,结构遭到严重损坏,软骨细胞明显减少,与模型组相比,吉非替尼组软骨病理损伤情况更严重,且三组Mankin′s评分(0.32±0.13)分、(7.38±0.28)分、(8.65±0.27)分]关系为假手术组<模型组<吉非替尼组(均P<0.05);三组间软骨凋亡率(4.12±0.38)％、(29.83±3.05)％、(37.61±3.72)％]、IL-1β(541.23±27.28)ng/L、(738.61±68.37)ng/L、(825.42±75.19)ng/L]、TNF-α(49.31±7.28)ng/L、(82.62±25.42)ng/L、(95.05±32.56)ng/L]水平之间的关系均为假手术组<模型组<吉非替尼组(均P<0.05);COL-Ⅱ阳性表达率间的关系为吉非替尼组<模型组<假手术组(均P<0.05),MMP-13阳性表达率间的关系为假手术组<模型组<吉非替尼组(均P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,吉非替尼组中EGFR蛋白磷酸化水平显著低于模型组,模型组又显著低于假手术组,同时吉非替尼组中p38MAPK蛋白磷酸化水平显著高于模型组,模型组又显著高于假手术组(均P<0.05).结论 吉非替尼通过抑制EGFR磷酸化活化p38MAPK信号途径,促进MMP-13蛋白表达,降解COL-Ⅱ,同时促进软骨处炎症细胞因子水平,从而加重软骨损伤.

Action mechanism of gefitinib in influencing cartilage injury of rabbit knee osteoarthritis by regulating EGFR