| 提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究 |
| |
| 引用本文： | 邓祥发,郭灵,林丹,曾庆堂,磨洁琳,韦力,蓝玲. 提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究[J]. 广西医学, 2006, 28(1): 23-25 |
| |
| 作者姓名： | 邓祥发 郭灵 林丹 曾庆堂 磨洁琳 韦力 蓝玲 |
| |
| 作者单位： | 广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021;广西医科大学人体解剖学教研室,南宁,530021 |
| |
| 摘 要： | 目的探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法.方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的重组5型腺病毒载体(Ad5CMVLacZ)转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃,反复冻融使细胞发生破溃,病毒从细胞内释放至上清液.在上清液中加入氯化铯,进行密度梯度超速离心,收集和透析病毒液,用空斑形成实验确定病毒的滴度.结果经提取和纯化的Ad5CMVLacZ病毒液清晰无色,用系列稀释法将其配制成10-2～10-13的稀释度,分别转染100%汇合的293细胞,连续追踪观察空斑的形成及其数目变化,直至转染后第10天,10-10稀释度的空斑数不再增加为止,计数其空斑,从而确定出mL病毒的滴度,即空斑形成单位(pfu),最终测定得到的结果是3.0×1010pfu/mL.结论用上述方法能制备出优质的重组腺病毒载体,后者足以达到对中枢神经系统损伤和疾病进行基因治疗的要求.
|
| 关 键 词： | 腺病毒载体 β-半乳糖苷酶基因 病毒提取 病毒纯化 空斑形成单位 |
| 收稿时间： | 2005-11-03 |
| 修稿时间： | 2005-11-03 |
A study on the improved efficiency of extraction, purification and titration of recombinant adenoviral vector |
| |
| DENG Xiang-fa,GUO Ling,LIN Dan,ZING Xing-tang,MO Jie-lin,WE Li,LAN Ling. A study on the improved efficiency of extraction, purification and titration of recombinant adenoviral vector[J]. Guangxi Medical Journal, 2006, 28(1): 23-25 |
| |
| Authors: | DENG Xiang-fa GUO Ling LIN Dan ZING Xing-tang MO Jie-lin WE Li LAN Ling |
| |
| Affiliation: | Nanning 530021 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Adenoviral vector LacZ gene Viral extraction Viral purification Plague-foming unit |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
