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Integrin β1在维生素C诱导小鼠诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化中的作用
作者姓名:魏婷  曾迪  欧东波  丁璐  李雪  郑强荪
作者单位:(第四军医大学唐都医院心脏内科,陕西 西安 710038)
基金项目:国家自然科学基金项目资助(31271039)
摘    要:目的:探讨整联蛋白β1(Integrin β1)在维生素C(Vc)诱导小鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向心肌样细胞(cardiomyocytes,CMs)分化中的作用。方法: 在立式显微镜下,分别摘取胚胎(12.5 d、14.5 d及16.5 d)BALB/c胎鼠、新生(出生1 d,P1)和成年BALB/c小鼠的心脏,提取总RNA,半定量及实时定量PCR分析心脏发育不同时期Integrin β1的表达。利用悬滴培养形成拟胚体(embryoid body,EB)的方法体外诱导iPSCs向心肌样细胞分化,诱导过程中分别添加Vc和integrin β1抑制剂(HMβ1-1)处理,共分为3组:对照组、Vc处理组和Vc+HMβ1-1处理组。诱导分化的第3、5、7天,半定量及实时定量PCR检测Oct4、integrin β1和心肌特异性因子(α-MHC、MLC2a)。用免疫荧光染色法检测心肌特异性结构蛋白心肌肌钙蛋白 I(cTnI)的表达。结果: Integrin β1在心脏胚胎发育时期(E12.5、E14.5、E16.5、P1)的表达递增(P<0.01),成年期表达有所回落(P<0.01)。半定量及实时定量PCR的结果提示,Vc组α-MHC、MLC2a的表达显著高于对照组(P<0.01),加integrin β1抑制剂HM β1-1后表达量降低(P<0.01)。跳动EBs计数的结果提示,诱导分化第10、14、18、22、26天,Vc组跳动EBs的百分率显著高于对照组(P<0.01);而Vc+ HMβ1-1组跳动EBs的百分率相对于Vc组显著降低(P<0.01)。免疫荧光染色显示,Vc组有较强的cTnI表达,添加integrin β1抑制后,Vc+HMβ1-1组cTnI的表达明显减弱。结论: Vc可促进iPSCs向心肌细胞分化,其机制可能是通过integrin β1介导。

关 键 词:诱导性多能干细胞   细胞分化   整联蛋白β1   维生素C   小鼠
收稿时间:2012-11-29
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