人源Fab噬菌体抗体库的构建与抗精氨酸加压素抗体的筛选 |
| |
作者姓名: | 董越华 胡占东 公倩 李常颖 畅继武 朱铁虹 |
| |
作者单位: | 1. 天津医科大学总医院内分泌科,天津,300052 2. 天津医科大学第二医院泌尿外科研究所,天津,300211 3. 山东医学高等专科学校内科学教研室,临沂,276003 |
| |
摘 要: | 目的:构建人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗精氨酸加压素特异性抗体并进行初步鉴定。方法:从18位健康成人的外周血淋巴细胞,提取总RNA。利用RT-PCR扩增人Fab抗体基因片段,将其克隆至噬菌粒载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab噬菌体抗体库。以固相化的精氨酸加压素为靶抗原对抗体库进行五轮筛选后,随机挑取50个单克隆进行phage-ELISA检测,阳性克隆行DNA测序分析。结果:成功构建库容为2.4×108的噬菌体抗体库,从中筛选到6株阳性克隆能够与精氨酸加压素特异性结合,其中阳性值最高的C4克隆行DNA测序分析证实其重链属IgG亚类,轻链为λ链。结论:构建大容量人源天然Fab抗体库,从中获得了特异性抗精氨酸加压素人源Fab抗体片段,有望为临床上精氨酸加压素的快速检测技术的建立奠定基础。
|
关 键 词: | 精氨酸加压素 噬菌体抗体库 Fab段 筛选 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|