| 人源肺腺癌单链抗体基因文库的构建 |
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| 引用本文： | 庞华,罗弋,李少林.人源肺腺癌单链抗体基因文库的构建[J].重庆医科大学学报,2008,33(11):1284-1287. |
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| 作者姓名： | 庞华 罗弋 李少林 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院核医学科;重庆医科大学基础医学院核医学教研室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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| 摘 要： | 目的:制备人源抗肺腺癌单链抗体(Single-chain variable fragment,scFv)基因文库.方法:利用肺腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过"剪切重叠延伸PCR"(Splicingover-lapping extend PCR,SOE-PCR)而形成scFv基因片断.将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E电转入Ecoli TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.结果:肺腺癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp.PCR连接产物的转化效率为2.2×107 CFU/μg,scFv的阳性插入率为83.3%(20/24).结论:成功地构建了人源抗肺腺癌scFv基因片断,为进一步筛选人源抗肺腺癌scFv库提供了试验基础. 入噬菌粒栽体pCANTAB-5E电转AEcoh TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物. 果:肺腺癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp.PCR连接产物的转化效率为2.2×107 CFU/μg,scFv的阳性插入率为83.3%(20/24).结论:成功地构建了人源
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| 关 键 词： | 噬菌体抗体库 单链抗体 肺腺癌 构建 |
Construction of gene library of human-originated single-chain variable fragment antibody associated with lung adenocarcinoma |
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