黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响

目的 研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响.方法 取膝骨关节炎患者手术后的退变膝关节软骨,进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,通过HE、Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行IL-1 β免疫荧光染色.观察软骨细胞退变情况后分为6组(A组:软骨细胞+DMEM对照组；B组:软骨细胞+25 mmol/ L黄芪甲苷；C组:软骨细胞+50 mmol/L黄芪甲苷；D组:软骨细胞+75 mmol/L黄芪甲苷；E组:软骨细胞+100 mmol/L黄芪甲苷；F组:软骨细胞+500 mmol/L黄芪甲苷),取4、8、24、48、72 h采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组退变软骨细胞内IL-1βmRNA的表达情况.结果 ①形态观察.原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,细胞纤丝较长.HE染色细胞质为红色,胞膜呈蓝色；甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色；Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光,细胞核采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚复染,在不同波段荧光激发下,胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光,证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原,主要分布在胞浆和细胞膜上,证明所培养的细胞为软骨细胞.IL-1 β免疫荧光染色可见清晰绿色荧光,软骨细胞以多角形多见.②IL-1 βmRNA表达.不同时间点间软骨细胞IL-1βmRNA表达水平有差异(F=13.236,P＜0.01)；不同组间软骨细胞IL-1βmRNA表达水平有差异(F=98.762,P＜0.01),A组高于B组、C组、D组、E组(P＜0.05～0.01),F组高于A组、B组、C组、D组、E组(P＜0.05～0.01);时间因素和组间因素存在交互效应(F=7.262,P＜0.01).结论 一定浓度的黄芪甲苷能通过抑制退变软骨细胞合成IL-1 β,延缓软骨细胞退变；浓度过高则会促进退变软骨细胞合成IL-1 β,加速软骨细胞退变.