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| 地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ RNA 探针的制备和应用 | |
| 引用本文： | 沈爱国,龚蕾蕾,丁斐,严美娟,王汉洲,顾建新.地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ RNA 探针的制备和应用[J].神经解剖学杂志,2003,19(4). |
| 作者姓名： | 沈爱国 龚蕾蕾 丁斐 严美娟 王汉洲 顾建新 |
| 作者单位： | 1. 南通医学院,江苏省神经再生重点实验室,南通,226001;复旦大学上海医学院基因研究中心,上海,200032 2. 南通医学院,江苏省神经再生重点实验室,南通,226001 3. 复旦大学上海医学院基因研究中心,上海,200032 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，江苏省自然科学基金，江苏省教育厅自然科学基金 |
| 摘 要： | 为了制备小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶I(β-1,4-galactosyltransferase 1,β-1,4-GalT-1)地高辛标记的RNA探针以探讨β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经组织的表达定位,本研究用提取的小鼠脑总RNA,采用RT-PCR方法,得到β-1,4-GalT-I的DNA片断,将其克隆到pGEM-T载体;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度;最后应用该探针,通过原位杂交的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在小鼠坐骨神经的表达.结果:构建了β-1,4-GalT-I/pGEM-T质粒,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针,应用该探针发现β-1,4-GalT-J在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达.以上结果表明,制备的地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-GalT-1 mRNA在组织中的表达.本研究为进一步分析β-1,4-GalT-I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础. |
| 关 键 词： | β-1 4半乳糖基转移酶-I RNA原位杂交探针 RT-PCR 地高辛标记 小鼠 |
THE PREPARATION OF RNA PROBES OF THE SENSE AND ANTISENSE β-1, 4-GALACTOSYLTRANSFERASEⅠLABELED WITH DIGOXIGENIN |
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| Abstract: | |
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