P16、 CyclinD1、CDK4在肺纤维化鼠肺组织的动态表达及意义 |
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引用本文: | 郑金旭,吕晓婷.P16、 CyclinD1、CDK4在肺纤维化鼠肺组织的动态表达及意义[J].中国神经再生研究,2010,14(41):7779-7783. |
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作者姓名: | 郑金旭 吕晓婷 |
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作者单位: | 江苏大学附属医院,江苏大学临床医学院 |
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基金项目: | 卫生部科研项目(wkj2006-2-026),江苏省“333工程”资助项目(苏人才办2007-16-09) |
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摘 要: | 背景:已有众多文献证实肺纤维化进程中肺组织肺泡上皮细胞进行性减少,但并未深究其原因。在肺纤维化进程中可能存在P16、CyclinD1、CDK4蛋白异常表达,P16-CyclinD1/CDK4细胞周期调控通路异常可能参与肺纤维化肺泡上皮细胞减少过程。
目的:研究P16、CyclinD1、CDK4在博来霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化肺组织中的动态表达及其意义。
设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2009-03/2009-09在江苏大学医学院实验室完成。
材料:健康雌性KM小鼠68只,体重(20±2) g,用于制备小鼠肺纤维化模型。
方法:68只小鼠随机分为博来霉素模型组(n=36)和生理盐水对照组(n=32),模型组气管内注射3.5 mg/kg的博莱霉素,对照组气管内注射相同体积的生理盐水,每组分别于造模后的3, 7, 14和28天随机选取8只小鼠处死, 取出左肺组织,常规制成4μm石蜡切片,取出右肺组织置于-70℃冰箱中留作Western blot。
主要观察指标:病理形态学观察;免疫组化定位和半定量检测肺组织P16、CyclinD1、CDK4蛋白表达;Western blot检测P16、CyclinD1、CDK4蛋白表达。
结果:小鼠64只进入结果分析,死亡4只,模型组小鼠分别于第14、20、22、26天各死亡1只。(1)HE染色:模型组病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显,出现典型肺纤维化改变。(2)免疫组化结果显示:①模型组肺组织P16、CDK4蛋白表达随时间增加而增强,CyclinD1蛋白表达随时间增加而减弱。②与对照组相比,P16、CDK4蛋白阳性细胞数量增多;CyclinD1蛋白3、7、14天阳性细胞数量多于同时间点对照组,28天则明显少于同时间点对照组。(3)Western blot结果显示:①模型组P16蛋白从7天起表达逐渐增加,P < 0.05;CDK4蛋白表达随时间增加而逐渐增加, P < 0.05;CyclinD1 蛋白表达随时间增加而逐渐减少,P < 0.05,但14天与28天无显著性差异。②与对照组相比,14、28天肺组织P16蛋白表达增多,P < 0.01;7、14、28天 CDK4蛋白表达增多,P<0.05;3、7天 CyclinD1 蛋白表达增多,P < 0.05;14、28天 CyclinD1 蛋白表达减少,P < 0.05。
结论:在肺纤维化进程中存在P16、CyclinD1、CDK4蛋白异常表达,P16-CyclinD1/CDK4细胞周期调控通路异常可能是肺纤维化肺泡上皮细胞减少的重要原因。
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关 键 词: | 肺纤维化 小鼠 P16 CyclinD1 CDK4 |
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