| 大鼠嗅球嗅鞘细胞的体外分离培养及纯化 |
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| 引用本文： | 郭冕,郑永日,李青松,王建交,孙家行,葛云龙,赵岩. 大鼠嗅球嗅鞘细胞的体外分离培养及纯化[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2009, 13(40). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.006 |
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| 作者姓名： | 郭冕 郑永日 李青松 王建交 孙家行 葛云龙 赵岩 |
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| 作者单位： | 哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科,黑龙江省哈尔滨市,150086 |
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| 摘 要： | 背景:差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的应用较多,细胞换液过程中使用含血清的培养基主要针对成纤维细胞的去除,而对神经元的去除作用不明显.目的:根据神经元体外培养需要血清的特性,拟利用无血清培养基在体外建立一种分离培养嗅鞘细胞的简单方法.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-01在哈尔滨医科大学动物实验中心完成.材料:成年SD大鼠10只,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供.方法:在差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的基础上,剪开大鼠颅骨,显露位于颅腔前方的嗅球,取出2只嗅球,在显微镜下去除嗅球表面的软脑膜和毛细血管及外周组织,保留富含嗅鞘细胞的嗅神经层和嗅球颗粒层,剪成1 mm3小块分离获取单细胞悬浮液,调整细胞密度至1×107L-1,接种在用poly-l-lysine包被的培养瓶或培养板中,于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养,第3天用无血清DMEM/F12培养基换液培养.主要观察指标:嗅鞘细胞的形态学观察、生长曲线分析、免疫荧光染色结果.结果:培养前3 d细胞数目无明显增加,甚至减少;然后细胞数目逐渐增多,13d细胞基本长满;传10代后细胞形态发生明显变化,胞浆内出现许多空泡,细胞增殖速度减慢或停止.纯化培养10 d后,培养板内双极和三极细胞均呈GFAP,NGFRp75阳性.结论:在差速贴壁+Thy1.1抗体及补体纯化法的基础上,利用无血清DMEM/F12培养基进行换液培养可使嗅鞘细胞迅速增殖,是一种效率较高的体外培养方法.
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| 关 键 词： | 嗅鞘细胞 分离 培养 纯化 |
In vitro isolation, culture, and purification of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb of rats |
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| Guo Mian,Zheng Yong-ri,Li Qing-song,Wang Jian-jiao,Sun Jia-xing,Ge Yun-long,Zhao Yan. In vitro isolation, culture, and purification of olfactory ensheathing cells from olfactory bulb of rats[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2009, 13(40). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.006 |
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| Authors: | Guo Mian Zheng Yong-ri Li Qing-song Wang Jian-jiao Sun Jia-xing Ge Yun-long Zhao Yan |
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