| 新克隆的硝基还原酶基因NOR1的表达及其产物的纯化 |
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| 作者姓名： | Nie XM Xiao BY Li XL Zhang BC Li WF Wang R Cao L Li GY |
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| 作者单位： | 中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,湖南,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划),国家自然科学基金,2001AA221031,30200292,30100217,, |
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| 摘 要： | 背景与目的：NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤／易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法：抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT－PCR扩增NOR1基因全长,经BamH I、Xho I双酶切后插入同样经BamH I、Xho I双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基－β-D硫代半乳糖苷（isopropyl-thiogalactoside,IPTG）诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Western blot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果：酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Western blot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论：成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。
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| 关 键 词： | 硝基还原酶 鼻咽肿瘤 NOR1基因 基因表达 RT－PCR 肿瘤生物学 |
| 文章编号： | 1000-467X(2003)02-0136-04 |
| 修稿时间： | 2002年9月20日 |
Expression of a new cloned nitroreductase gene NOR1 and purification of expressed product |
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| Nie XM,Xiao BY,Li XL,Zhang BC,Li WF,Wang R,Cao L,Li GY.Expression of a new cloned nitroreductase gene NOR1 and purification of expressed product[J].Chinese Journal of Cancer,2003,22(2):136-139. |
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| Authors: | Nie Xin-Min Xiao Bing-Yi Li Xiao-Ling Zhang Bi-Cheng Li Wei-Fang Wang Rong Cao Li Li Gui-Yuan |
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| Institution: | Cancer Research Institute, Xiangya School of Medicine, Central South University, Changsha, Hunan, 410078, PR China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nasopharyngeal neoplasms NOR1 gene Gene expression |
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