| 利用Helper-Free系统构建cdk5-siRNA腺相关病毒载体并鉴定 |
| |
| 引用本文： | 丁志刚,张旻,姜亚平,卜碧涛,王雪贞. 利用Helper-Free系统构建cdk5-siRNA腺相关病毒载体并鉴定[J]. 卒中与神经疾病, 2006, 13(2): 67-70 |
| |
| 作者姓名： | 丁志刚 张旻 姜亚平 卜碧涛 王雪贞 |
| |
| 作者单位： | 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30400141,30270484) |
| |
| 摘 要： | 目的构建能表达CDK5特异性小干扰RNA(siRNA)(cdk5-siRNA)的重组腺相关病毒(AAV)载体,体外观察其对CDK5基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术将合成的特异性cdk5 RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper-Free System中的表达质粒pAAV-MCS,构建出质粒pAAV-MCS-cdk5-siRNA,通过酶切测序鉴定重组质粒;将该质粒与系统中的控制质粒pAAV-RC、辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染HEK293细胞,包装得到表达cdk5-siRNA的重组腺相关病毒载体(rAAV-cdk5-siRNA);用斑点杂交法测定重组病毒的滴度,重组病毒感染体外培养的PC12细胞,W estern b lot检测其抑制cdk5表达的效果。结果成功构建并包装出重组腺相关病毒载体rAAV-cdk5-siRNA,病毒滴度达4×1013/m l,重组病毒感染后的PC12细胞cdk5表达明显下调。结论构建的重组腺相关病毒载体rAAV-cdk5-siRNA能明显干扰cdk5的表达,为将其进一步应用于神经变性疾病的治疗研究奠定了基础。
|
| 关 键 词： | cdk5 小干扰RNA 腺相关病毒 基因治疗 神经变性 |
| 文章编号： | 1007-0478（2006）02-0067-04 |
| 收稿时间： | 2005-10-19 |
| 修稿时间： | 2005-10-19 |
Construction and identification of recombinant adeno-associated virus vector encoding cdk5-siRNA by Helper-Free system |
| |
| Ding Zhigang,Zhang Min,Jiang Yaping,et al.. Construction and identification of recombinant adeno-associated virus vector encoding cdk5-siRNA by Helper-Free system[J]. Stroke and Nervous Diseases, 2006, 13(2): 67-70 |
| |
| Authors: | Ding Zhigang Zhang Min Jiang Yaping et al. |
| |
| Affiliation: | Ding Zhigang,Zhang Min,Jiang Yaping,et al.Department of Neurology,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Cdk5 siRNA Adeno-associated virus Gene therapy Neurodegenerative |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
