RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3（STAT3）的表达，及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列，并转染HeLa细胞，采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达，以筛选有效沉默p53的shRNA序列。将筛选的序列转染HeLa细胞后，采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达；采用四甲基噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖；采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果：构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达，尤以shRNA3的沉默效果最好，转染shRNA3后，HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41±0.11，显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNA1组和p53-shRNA2组（P均 < 0.05），故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞。将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后，p53-shRNA3组STAT3 mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25，显著高于未转染组（0.53 ±0.10和0.74±0.14）及空质粒组（0.55±0.11和0.73±0.15）（P均 < 0.05）。MTT法分析结果显示，在孵育24、36、48和72 h时，p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组（P均 < 0.05）。Transwell法分析结果显示，转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目（59.36±5.33）显著高于未转染组（15.73±1.29）和空质粒组（16.01±1.34）（P均 < 0.05）。结论：RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达，并促进细胞的增殖及侵袭能力。