| 人骨形成蛋白-7基因重组腺病毒的构建及其在兔骨髓间充质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 鱼兵,范清宇,马保安,周勇,张明华,龙华,闫露. 人骨形成蛋白-7基因重组腺病毒的构建及其在兔骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 医学争鸣, 2004, 25(17): 1537-1540 |
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| 作者姓名： | 鱼兵 范清宇 马保安 周勇 张明华 龙华 闫露 |
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| 作者单位： | 第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所,陕西,西安,710038;第四军医大学西京医院康复诊疗中心,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:克隆人骨形成蛋白-7(BMP-7)基因并构建其重组腺病毒,观察其在兔BMSc中的表达. 方法:用RT-PCR方法从人胎肾组织中克隆人BMP-7基因全长cDNA并测序;将BMP-7基因cDNA克隆到穿梭载体形成转移质粒pAdTrack-CMV-BMP-7,经PmeI酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定,PacI酶切线性化后转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7,将AdBMP-7体外感染兔BMSc后,以RT-PCR方法及观察AdEasy系统上的绿色荧光蛋白表达鉴定BMP-7基因的表达. 结果:用RT-PCR方法从胎肾组织中克隆出1296 bp的cDNA,测序证实为人BMP-7基因;酶切鉴定表明BMP-7基因已插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功;经293细胞包装3 d后可观察到绿色荧光蛋白表达(GFP),氯化铯梯度离心法最终获得约3×109 efu/L滴度的重组病毒;体外感染兔BMSc后RT-PCR方法及荧光显微镜证实BMP-7基因可在兔BMSc中表达. 结论:成功克隆人BMP-7基因并构建其重组腺病毒,证实了其在BMSc的表达,为骨再生的局部基因治疗打下基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒 表达载体 人骨形成蛋白-7 基因克隆 |
| 文章编号： | 1000-2790(2004)17-1537-04 |
| 修稿时间： | 2004-04-13 |
Construction of recombinant adenoviruses carrying human BMP-7 and its expression in rabbit bone marrow stem cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenovirus expression vector human BMP-7 gene cloning |
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