甲型流感病毒血凝素头部蛋白结构域的原核表达及血清学分析题录

目的在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中, 通过IPTG诱导, 在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白, 验证表达的准确性, Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白, 多剂次免疫家兔, 获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时, 重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 评价其免疫原性。结果 rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体, 可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体, 可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原, 在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体, 可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。