| 血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 曲乐丰,景在平. 血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达[J]. 中华实验外科杂志, 2003, 20(10): 915-917 |
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| 作者姓名： | 曲乐丰 景在平 |
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| 作者单位： | 200433,上海,第二军医大学长海医院血管外科暨全军血管外科研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (30 1 70 92 6) |
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| 摘 要： | 目的 构建血管内皮生长因子(VEGF)和Fas配体(FasL)共表达质粒，并鉴定其在细胞中的表达情况。方法 根据入VEGFl65和FasL的cDNA序列分别设计、合成引物，经扩增、连接、酶切、插入等得到重组表达质粒pCI-VEGFl65和pCI-FasL。再以此为基础构建得到编码FasL和VEGFl65的共表达质粒pCI-FasL-IRES-VEGFl65(简称pCI-FIV)。用脂质体将各表达质粒(2μg)转染NIH3T3细胞，用流式细胞术、ELISA和Western-blot检测其FasL和VEGFl65表达情况。结果 细胞裂解液的Western-blot检测表明，重组质粒pCI-VEGFl65和pCI-FIV能表达VEGFl65。分子量与预期kD一致。细胞培养上清的ELISA检测表明，pCl-VEGFl65和pCI-FIV均能分泌性表达vEGFl65。流式细胞仪检测表明，质粒pCI-FasL、pCI-FIV稳定转染的NIH3T3细胞表面的绿色荧光阳性率分别为98．0％和96．5％，而空载体转染细胞的阳性率为3．2％。ELISA检测结果显示，pCI-FasL、pCI-FIV转染NIH3T3细胞培养上清中均存在可溶性FasL。结论 成功构建的FasL和VEGFl65共表达质粒可成功转染细胞并能分泌性表达VEGFl65，同时可表达膜结合形式的FasL和可溶性FasL，为将来血管内膜增生的基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 Fas配体 共表达质粒 构建 基因表达 基因治疗 |
| 修稿时间： | 2002-09-25 |
Co-expression plasmid construction of vascular endothelial growth factor and Fas ligand and detection of its expression in cultivated cells |
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| QU Le feng,JING Zai ping. Co-expression plasmid construction of vascular endothelial growth factor and Fas ligand and detection of its expression in cultivated cells[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2003, 20(10): 915-917 |
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| Authors: | QU Le feng JING Zai ping |
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| Affiliation: | QU Le feng,JING Zai ping.Department of Vascular Surgery and Institute of Vascular Surgery of PLA,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vascular endothelial growth factor Fas ligand Gene expression |
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