| T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛选、靶分子的预测、构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 李伟,薛茜,郭张燕,王涛,温伟红,韩涛,孟艳玲,杨安钢.T淋巴细胞活化相关的microRNA的筛选、靶分子的预测、构建和鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(8). |
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| 作者姓名： | 李伟 薛茜 郭张燕 王涛 温伟红 韩涛 孟艳玲 杨安钢 |
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| 作者单位： | 第四军医大学免疫学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973)资助项目，教育部"长江学者和创新团队发展计划"资助项目 |
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| 摘 要： | 目的: 筛选T细胞活化相关的microRNA并预测其靶分子,通过双荧光素酶实验鉴定这些microRNA的靶分子方法: 利用Exiqon miRNA基因表达谱芯片,以活化的Jurkat细胞(用CD3抗体和CD28抗体双信号活化)为实验组,未活化Jurkat细胞为对照组,分析了二者miRNA表达谱的差异,找出表达水平显著改变的miRNA,并通过实时定量PCR的方法对芯片结果进行验证;构建miRNA的真核表达载体;利用生物信息学方法预测miRNA的靶分子,构建含靶分子3′UTR的荧光素酶报告基因质粒;分别将miRNA基因真核表达质粒与含有靶分子的荧光素酶报告基因质粒共转染HEK293细胞,进行荧光素酶实验来鉴定miRNA的靶分子结果: Exiqon miRNA基因表达谱芯片显示: Jurkat细胞活化后,miR-202*、 miR-33b、 miR-568和miR-576的表达明显下调;实时定量PCR验证结果与芯片结果一致;酶切鉴定与序列测定证实miR-568的真核表达载体构建成功;利用miRanda软件预测miR-568的靶分子,筛选出与T细胞活化密切相关的分子;双荧光素酶实验显示miR-568对NFAT5有比较明显的抑制作用结论: T细胞活化后,miR-202*、 miR-33b、 miR-568和miR-576表达明显下调;NFAT5可能是miR-568作用的一个靶分子
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| 关 键 词： | 实时定量PCR T细胞活化 靶分子 双荧光素酶实验 |
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