核糖体蛋白S6 shRNA慢病毒载体的构建及其对肺腺癌A549细胞株增殖的影响

目的 探讨靶向抑制核糖体蛋白S6（rpS6）表达的短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）慢病毒载体的构建方法及抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖的影响。方法 合成针对rpS6基因的双链寡核苷酸序列，插入质粒载体pGCsil-GFP，转化大肠杆菌细胞，测序鉴定插入片段；再通过293T细胞转染和慢病毒包装，收集浓缩病毒并感染肺腺癌A549细胞株。流式细胞技术分选强阳性表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞克隆，荧光定量PCR及Western blot检测rpS6基因的mRNA和蛋白干扰效率。体外利用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值，分析抑制rpS6表达对肺腺癌A549细胞株增殖能力的影响。结果 重组pGCsil-sh-rpS6-GFP质粒经测序鉴定示：插入序列与rpS6干扰序列完全符合，证实pGCsil-sh-rpS6-GFP质粒构建成功。sh-rpS6慢病毒稳定感染A549细胞株后，流式细胞技术分选GFP强阳性表达的细胞克隆比率为86.80%。荧光定量PCR与Western blot检测示： sh-rpS6组的mRNA和蛋白干扰效率分别为(79.72±6.83)%、（83.77±12.13)%。体外增殖实验示：与A549细胞相比，sh-rpS6组在各时间点的OD值较对照组均下降（均P<0.05）。结论 构建的sh-rpS6慢病毒载体能稳定、有效地抑制肺腺癌A549细胞株rpS6的表达，并有效减慢A549细胞株的增殖速度。

Construction of sh-\rpS6 Lentivirus Vectors and Its Effect on Proliferation in Lung Adenocarcinoma A549 Cell Lines