| 摘 要： | 目的观察健脾解毒方对肠癌HCT116细胞DNA损伤修复相关基因表达及其细胞增殖的影响。方法不同浓度健脾解毒方作用于HCT116细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力;200 mg/L的健脾解毒方处理HCT116细胞24 h后,利用二代基因测序技术测定细胞内基因mRNA相对表达量,筛选明显下调及与化疗耐药相关的DNA损伤修复相关基因;荧光定量PCR鉴定DNA损伤修复相关基因mRNA表达变化,Western blot检测蛋白表达变化。结果 CCK-8法细胞增殖实验结果表明,健脾解毒方对HCT116细胞具有显著的增殖抑制作用,健脾解毒方对HCT116细胞的增殖抑制呈时间-剂量依赖性(P0.01);健脾解毒方对HCT116细胞的24 h、48 h、72 h半数抑制浓度IC50分别为85.7 mg/L、34.44 mg/L、20.56 mg/L。二代测序结果发现,共有52种DNA损伤修复相关基因的表达受到健脾解毒方的调控,结合文献筛选出ATM、ATR、CHEK1、MDC1和XRCC3作为候选基因进行下一步分析;荧光定量PCR的结果表明,健脾解毒方可以显著抑制HCT116细胞ATM、ATR、CHEK1、MDC1、XRCC3的mRNA表达(P0.01);Western blot的结果显示,健脾解毒方可明显降低HCT116细胞ATM、ATR、CHEK1、MDC1、XRCC3基因的蛋白表达(P0.05、P0.01)。结论健脾解毒方可以有效抑制肠癌细胞的增殖,其机制可能是抑制DNA损伤修复相关基因的表达。
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