| 2种Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的制备及其意义 |
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| 引用本文： | 达展云,范亚平,张伟兰,施岚,施辉,陈晓岚.2种Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的制备及其意义[J].天津医药,2009,37(8). |
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| 作者姓名： | 达展云 范亚平 张伟兰 施岚 施辉 陈晓岚 |
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| 作者单位： | 南通大学附属医院肾内科,226001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，江苏省自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建Heymann肾炎致病原受体相关蛋白(RAP)全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达并纯化相应的融合蛋白.方法:通过RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,对阳性克隆进行测序分析,设计针对RAP全长和羧基端带有EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切位点的特异引物,通过PCR合成RAP全长359个氨基酸和羧基端108个氨基酸的DNA.纯化后与含有GST的pGEX-4T-1载体体外重组连接,亚克隆到感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,表达的融合蛋白通过GST-Sepharose 4B亲和层析法纯化,并经SDS-PAGE和Western Blot检测.结果:酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083和pGEX-4T-1-RAP324,含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达出RAP全长70 ku和羧基端40 ku的融合蛋白.Western Blot结果显示分别在分子质量70ku、40ku处出现特异性条带,与理论相符.结论:成功构建了RAP1083、RAP324与pGEX-4T-1融合基因表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续研究Heymann肾炎的分子发病机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | 肾小球肾炎 基因表达 遗传载体 重组融合蛋白质类 |
Role of Full-Length Fusion Protein and Receptor-Associated Protein in Heymann Nephritis |
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| DA Zhanyun,FAN Yaping,ZHANG Weilan,SHI Lan,SHI Hui,CHEN Xiaolan.Role of Full-Length Fusion Protein and Receptor-Associated Protein in Heymann Nephritis[J].Tianjin Medical Journal,2009,37(8). |
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| Authors: | DA Zhanyun FAN Yaping ZHANG Weilan SHI Lan SHI Hui CHEN Xiaolan |
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