| 肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响 |
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| 引用本文： | 杨琳,罗建民,刘小军,温树鹏,杨敬慈,张敬宇.肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响[J].中华血液学杂志,2009,30(8). |
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| 作者姓名： | 杨琳 罗建民 刘小军 温树鹏 杨敬慈 张敬宇 |
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| 作者单位： | 河北医科大学第二医院血液科,河北省血液学重点实验室,石家庄,050000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，河北省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 从分子水平探讨肌醇5'磷酸酶(SHIP)基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响.方法 应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞,通过流式细胞术检测K562/SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化;MTT法检测细胞增殖活性改变,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测SHIP mRNA水平变化,Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21WAF1/CIPI、P27KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化.结果 野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖,并产生明显的G0/G1期阻滞G0/G1期细胞分别为(34.2±7.8)%和(0.7±8.3)%,P<0.01];但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变G0/G1期细胞分别为(33.4±4.2)%和(36.3±6.7)%,P>0.05].Western blot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降(P<0.01),p21WAF1/CIPI、p27KIP1表达增高,而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响(P>0.05).结论 ①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平,进而抑制其下游cyclin D1表达,上调p21WAF1/CIPI和p27KIP1基因表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制K562细胞增殖;②SHIP基因突变体(TTC→CTC,Phe→Leu)丧失了对K562细胞的增殖抑制作用,提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常.
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| 关 键 词： | 基因 SHIP K562细胞 细胞周期 细胞周期蛋白D1 |
Effects of SHIP gene mutation on cell cycle related proteins and phosphorylated Akt in K562 cells |
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| YANG Lin,LUO Jian-min,LIU Xiao-jun,WEN Shu-peng,YANG Jing-ci,ZHANG Jing-yu.Effects of SHIP gene mutation on cell cycle related proteins and phosphorylated Akt in K562 cells[J].Chinese Journal of Hematology,2009,30(8). |
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| Authors: | YANG Lin LUO Jian-min LIU Xiao-jun WEN Shu-peng YANG Jing-ci ZHANG Jing-yu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gene SHIP K562 cells Cell cycle Cyclin D1 |
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